凝膠成像分析用于對電泳凝膠圖像的分析研究,采用數(shù)字攝像頭將置于暗箱內的電泳凝膠在紫外光或白光照射下的影像取進計算機,通過相應的凝膠分析軟件,可一次性完成DNA、RNA、蛋白凝膠、薄層層析板等圖像的分析,凝膠成像分析zui終可得到凝膠條帶的峰值、分子量或堿基對數(shù)、面積、高度、位置、體積或樣品總量。
總體上來說凝膠成像分析可應用于:凝膠成像系統(tǒng)可以用于:蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析。
凝膠成像分析系統(tǒng)是帶暗箱的分析儀,由紫外透射燈箱、白光燈箱、暗箱、攝像頭、計算機系統(tǒng),凝膠分析軟件等組成,可在明室中操作。該儀器配備白光光源及三種波長的紫外光源,您可根據(jù)自己的需要,單獨使用其中某個波長的光源,亦可同時使用幾種波長光源。
對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
凝膠成像分析在分子生物學和生物工程研究中,zui常用到的是對蛋白表達產(chǎn)物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統(tǒng)的方法是利用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合現(xiàn)在實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分數(shù)。就此功能而言,凝膠成像分析與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數(shù),密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。